染色质免疫共沉淀(ChIP)理论及注意事项
来源:新能源 2025年02月21日 12:19
病原体形容词相来得:目地病原体复合体DNA复合体时,须要无需分设形容词病原体相来得组。形容词相来得所可用的病原体可以选择目地复合体病原体肠道的血清复合体。
4. 能够复合体病原体
ChIP测试中所与一般的抗体-病原体病原体反应测试不想像中一样。
正因如此测试如western blot、复合体质病原体共等,抗体上只要假定与病原体联结的位点,则二者的病原体反应基本不受到复合体质多种类型因素。(参见往期章节:①.全程剖析Western blot定律,你才能掌控它。② Co-IP病原体共)
ChIP测试中所,体细胞步骤时,复合体和DNA处在小分子状况,能够复合体的联结位点过渡到空间阻碍,遭受病原体难以与能够复合体联结过渡到复合体。因此,能力够要用western blot、复合体质病原体共测试的病原体都是必所无需用ChIP测试,一定一定要可用并未过ChIP验证的病原体,否则测试无论如何失败。此外,病原体的沸点、孵化小时、孵化温度所无需根据能够复合体的同位素尽快。能够复合体同位素较差时,可能所无需调整活着细胞会数目、过夜4℃孵化等。
5. 正因如此测试转换
ChIP测试反复较长,反复死板,所无需反复的洗柱、离心、吸液、换管、孵化、振荡。转换说起来很简单,但是每一步都所无需分心转换,极其考验基本功,借此大家多多注意。
6. 测试结果分析
对于Input DNA组,使用1.8%琼脂糖发射光谱,结果必要是图片集中所于150bp到350bp相互间,这样长度的DNA图片才是符合要求的。
进一步,内相来得组、形容词病原体相来得组、白血病病原体相来得组的纯化DNA先使用PCR扩增,随后通过1.8%琼脂糖发射光谱,取得的结果必要是这样的:空白相来得组无深蓝色、形容词病原体相来得组深蓝色若或无、内相来得组强深蓝色、白血病相来得组看到强深蓝色。只有这样的结果才是成功的。后续才能进行RT-PCR测试。
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